HPS-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407496

概要

HPS6は、メラノソームや血小板の濃染顆粒などの特殊な細胞小器官へのカーゴの選別および小胞輸送を制御する「リソソーム関連小器官形成複合体2（BLOC-2）」の中核構成因子であるHPS-6をコードします。HPS-6は、エンドソーム輸送と小器官の成熟に関与することで、タンパク質の局在、膜動態、ならびにリソソーム機能と交差する細胞内輸送経路に影響を及ぼします。HPS6の機能障害は、リソソーム関連小器官の異常に加え、色素沈着や止血に関連する細胞表現型の変化を特徴とするHermansky–Pudlak症候群6型と関連しています。HPS6の機能喪失モデルは、関連するヒト細胞システムにおいて、小器官形成、カーゴ送達、ならびに細胞種特異的な輸送プログラムの機構を解析するために用いられます。

HPS-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHPS6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HPS6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HPS6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HPS-6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HPS-6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HPS6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HPS-6の機能に不可欠なHPS6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HPS6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HPS-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHPS-6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HPS6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HPS-6 HDRプラスミド（h）および HPS-6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHPS6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHPS6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。