HPRG Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404772-ACT

A glicoproteína rica em histidina (HPRG), codificada pelo gene humano **HRG**, é uma proteína plasmática secretada que se liga à heparina, ao plasminogênio, à fibrina(ogênio) e a íons metálicos divalentes, modulando interações com a matriz extracelular e o equilíbrio proteolítico. Por meio dessas interações, a HPRG influencia a dinâmica da coagulação e da fibrinólise, a sinalização angiogênica e processos da imunidade inata, incluindo o comportamento de neutrófilos e a remoção de detritos celulares. A expressão de **HRG** e os níveis circulantes de HPRG têm sido investigados como variáveis associadas a estados inflamatórios e à biologia vascular, com implicações para a interpretação de fenótipos ligados à hemostasia e à imunidade. Como uma proteína multifuncional de ligação a ligantes, a HPRG é frequentemente estudada em vias que conectam tromboinflamação, remodelamento da matriz e sinalização de glicosaminoglicanos na superfície celular.

HPRG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HRG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HPRG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HRG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HRG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HPRG. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HRG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HPRG no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HPRG em células tumorais com expressão de HRG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.