HoxD10 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403328-ACT

HOXD10は、ホームボックス型転写因子HoxD10をコードしており、前後軸のパターニングや四肢形成を制御する主要な調節因子です。配列特異的なDNA結合と転写制御を介して細胞のアイデンティティ確立に寄与します。分化した組織では、HOXD10は細胞移動、接着、細胞外マトリックスのリモデリングを司るプログラムに関与し、系譜決定を形作る発生関連の転写ネットワークやシグナル伝達経路と連携します。HOXD10の発現変化や制御異常は、浸潤性や転移能の変化などの腫瘍性表現型と関連づけられており、上皮—間葉系ダイナミクスに結び付いた遺伝子群の制御における役割を反映しています。文脈依存的に機能する発生調節因子として、HOXD10はヒト細胞モデルにおける転写回路、クロマチン制御、疾患関連の遺伝子発現状態の研究にしばしば用いられます。

HoxD10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HOXD10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HoxD10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HOXD10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHOXD10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HoxD10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHOXD10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHoxD10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHOXD10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHoxD10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。