HoxB5 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420914-ACT

Hoxb5は、ホメオボックス型転写因子HoxB5をコードしており、配列特異的にDNAへ結合して転写を制御することで、胚発生における前後軸（anterior–posterior axis）のパターニングや領域アイデンティティの形成を担います。マウスでは、HoxB5は前駆細胞の運命決定、分化のタイミング、組織の形態形成を制御する発生関連の遺伝子制御ネットワークの協調に関与し、より広範なHOXクラスターのプログラムやクロマチンを介した転写制御とも統合的に機能します。その活性は器官形成、造血、ならびに神経堤関連プロセスを司る経路に影響し、HOX発現の変化は、分化制御の破綻や増殖状態の異常と関連づけてしばしば研究されています。HOX因子は制御階層の上流に位置するため、Hoxb5は発生における転写回路や、疾患モデルに関わる系譜プログラミング機構を解析する目的で広く用いられています。

HoxB5 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Hoxb5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HoxB5 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Hoxb5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHoxb5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HoxB5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHoxb5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHoxB5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHoxb5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHoxB5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。