HoxB2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-404533-LAC

HOXB2 codifica o fator de transcrição homeobox HoxB2, uma proteína de ligação ao DNA específica de sequência que ajuda a estabelecer o padrão anteroposterior e a identidade segmentar durante o desenvolvimento embrionário. O HoxB2 regula programas de expressão gênica que controlam a especificação do destino celular, a diferenciação e a morfogênese tecidual por meio de redes transcricionais que se cruzam com vias de sinalização do desenvolvimento, como programas responsivos ao ácido retinoico. Expressão aberrante de HOXB2 foi relatada em diversos contextos tumorais e em distúrbios do desenvolvimento, nos quais a transcrição regulada por HOX alterada pode influenciar a proliferação, o comprometimento de linhagem e fenótipos migratórios. Na pesquisa biomédica, HOXB2 é estudado como um impulsionador de circuitos regulatórios gênicos do desenvolvimento e como um modulador dependente do contexto de estados transcricionais oncogênicos.

As Partículas de Ativação Lentivirais HoxB2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de HOXB2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais HoxB2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição HOXB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de HoxB2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo HOXB2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.