HoxA5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402499-ACT

HOXA5 codifica o fator de transcrição homeobox HoxA5, um regulador de ligação ao DNA dependente de sequência que ajuda a estabelecer o padrão ântero-posterior e a identidade dos segmentos durante o desenvolvimento humano. Em tecidos diferenciados, o HoxA5 contribui para programas que controlam o comprometimento do destino celular, a diferenciação epitelial e a morfogênese tecidual, ao coordenar redes transcricionais com outros cofatores HOX. A expressão desregulada de HOXA5 tem sido associada a alterações na proliferação, na invasão e em mudanças do estado de linhagem em múltiplos contextos de doença, tornando-o um ponto útil para estudar reprogramação do desenvolvimento e controle transcricional. Como regulador da expressão gênica, o HoxA5 é frequentemente analisado em vias ligadas à diferenciação, à remodelação da matriz extracelular e ao controle de crescimento dependente do contexto.

HoxA5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HOXA5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HoxA5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HOXA5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HOXA5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HoxA5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HOXA5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HoxA5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HoxA5 em células tumorais com expressão de HOXA5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.