HoxA1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403158-ACT

HOXA1は、ヒトのホメオボックス型転写因子HoxA1をコードしており、配列特異的にDNAへ結合して転写を制御することで、発生初期の前後軸（頭尾軸）のパターン形成を担い、後脳および頭蓋顔面の発生を誘導します。系譜決定プログラムの制御を通じて、HOXA1は、レチノイン酸応答性シグナル伝達と交差する転写ネットワークや、より広範なクロマチン制御下の分化プロセスに影響を与えます。HOXA1発現の異常は、発生関連遺伝子の発現状態の変化と関連づけられており、先天奇形や、がんにおける転写リプログラミングの文脈で研究されています。発生制御因子として、HOXA1は細胞運命転換やモルフォゲン駆動のパターン形成を解析する際のマーカーおよび機能的ハブとして広く用いられています。

HoxA1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HOXA1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HoxA1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HOXA1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHOXA1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HoxA1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHOXA1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHoxA1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHOXA1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHoxA1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。