Hox11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404662-ACT

TLX1 (Hox11) é um fator de transcrição homeobox que regula o padrão embrionário e a especificação de linhagens, com papéis de destaque em programas de diferenciação hematopoética. Ao se ligar ao DNA em elementos de resposta HOX, o Hox11 modula redes transcricionais que se cruzam com a sinalização do desenvolvimento e a remodelação da cromatina para controlar a proliferação e decisões de destino celular. A expressão desregulada de TLX1 está ligada a estados alterados de expressão gênica do desenvolvimento e tem sido associada à leucemia linfoblástica aguda de células T, sustentando seu uso como um nó para estudar a reprogramação transcricional oncogênica. Em modelos celulares humanos, TLX1 serve como um regulador tratável para investigar circuitos regulatórios gênicos dirigidos por HOX e fenótipos de diferenciação dependentes do contexto.

Hox11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TLX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Hox11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TLX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TLX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Hox11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TLX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Hox11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Hox11 em células tumorais com expressão de TLX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.