Homer-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424092-ACT

O gene Homer1 de camundongo codifica a Homer-1, uma proteína de ancoragem (scaffolding) da densidade pós-sináptica que organiza os receptores metabotrópicos de glutamato do grupo I e seus efetores associados para coordenar a sinalização de cálcio, a plasticidade sináptica e programas gênicos dependentes de atividade. Por meio de interações mediadas por EVH1, a Homer-1 acopla mGluR1/5 à liberação de cálcio dependente do receptor de IP3 e interage com Shank e outros componentes da PSD para moldar a arquitetura das sinapses excitatórias. Alterações na sinalização de HOMER1 têm sido associadas à desregulação da neurotransmissão glutamatérgica e à remodelação de circuitos em contextos de doenças neuropsiquiátricas e neurodegenerativas, incluindo fenótipos relacionados ao estresse e suscetibilidade a convulsões. Como uma isoforma de gene de resposta imediata e também como uma proteína estrutural de forma longa, a Homer-1 oferece um ponto acessível para estudar adaptação sináptica dependente de estímulo e o tráfego de receptores.

Homer-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Homer1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Homer-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Homer1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Homer1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Homer-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Homer1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Homer-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Homer-1 em células tumorais com expressão de Homer1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.