hnRNP A2/B1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400635-ACT

HNRNPA2B1 codifica la ribonucleoproteina nucleare eterogenea A2/B1 (hnRNP A2/B1), una proteina legante l’RNA che coordina lo splicing del pre‑mRNA, la stabilizzazione dell’mRNA e il trasporto nucleo‑citoplasmatico attraverso il riconoscimento di specifici motivi dell’RNA all’interno di complessi ribonucleoproteici. Agisce anche come adattatore per l’esportazione dell’mRNA e contribuisce alla dinamica dei granuli di RNA, collegandosi così alle risposte allo stress e alla regolazione post‑trascrizionale dell’espressione genica. hnRNP A2/B1 partecipa a vie che governano programmi di splicing alternativo, processamento dell’RNA e controllo della traduzione, influenzando quindi le transizioni di stato cellulare e la diversità del proteoma. La deregolazione di HNRNPA2B1 è stata associata a reti di splicing alterate e a un metabolismo dell’RNA aberrante osservati nel cancro e nella neurodegenerazione, a supporto del suo impiego nello studio dei meccanismi di regolazione dell’RNA e del rimodellamento trascrittomico rilevante per la malattia.

hnRNP A2/B1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HNRNPA2B1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

hnRNP A2/B1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HNRNPA2B1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HNRNPA2B1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di hnRNP A2/B1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HNRNPA2B1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da hnRNP A2/B1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via hnRNP A2/B1 nelle cellule tumorali con espressione di HNRNPA2B1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.