HNF-4α Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420892-ACT

Hnf4a codifica o fator nuclear de hepatócitos 4 alfa (HNF-4α), um fator de transcrição da família dos receptores nucleares regulado por ligante, que coordena programas gênicos epiteliais e metabólicos no fígado, intestino, pâncreas e rim. O HNF-4α liga-se a elementos específicos de resposta no DNA para regular redes que controlam a homeostase de lipídios e glicose, o metabolismo de ácidos biliares, a desintoxicação de xenobióticos e a diferenciação epitelial, integrando-se a vias que incluem a sinalização de PPAR e circuitos de maturação de hepatócitos. Em modelos murinos, alterações na atividade de Hnf4a estão associadas a disfunção hepática, prejuízo da barreira intestinal e de programas de absorção, e a uma desregulação metabólica mais ampla, tornando-o um nó central para estudos de identidade tecidual e controle homeostático.

HNF-4α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Hnf4a sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HNF-4α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Hnf4a em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Hnf4a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HNF-4α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Hnf4a nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HNF-4α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HNF-4α em células tumorais com expressão de Hnf4a silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.