Plásmido Doble Nickase (m) HNF-1β: sc-423295-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)HNF-1β consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HNF-1β (m) y el plásmido de doble nickasa HNF-1β (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Hnf1b. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) HNF-1β | sc-423295-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) HNF-1β | sc-423295-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Hnf1b codifica el factor nuclear 1β de hepatocitos (HNF-1β), un factor de transcripción que contiene un homeodominio y que regula la diferenciación epitelial y la morfogénesis de órganos en el riñón, el páncreas, el hígado y el tracto biliar. HNF-1β se une a elementos promotores y potenciadores para coordinar programas génicos que gobiernan la identidad de los segmentos del nefrón, el transporte tubular y la polaridad epitelial, integrándose con redes transcripcionales del desarrollo durante la ramificación y el patrón de los conductos. La actividad desregulada de HNF-1β se asocia con anomalías congénitas del riñón y del tracto urinario, la formación de quistes renales y defectos del desarrollo pancreático, lo que lo convierte en un nodo clave para estudiar las relaciones genotipo-fenotipo en tejidos epiteliales. En modelos murinos, la perturbación de Hnf1b se utiliza ampliamente para investigar el control transcripcional de la organogénesis, la especificación de linajes ductales y la regulación de genes metabólicos.
HNF-1β El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Hnf1b en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Hnf1b. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Hnf1b. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Hnf1b alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.