HNF-1α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400594-ACT

HNF1A codifica o fator nuclear de hepatócitos 1-alfa (HNF-1α), um fator de transcrição com homeodomínio que governa programas gênicos epiteliais e hepatopancreáticos. Ele regula redes que controlam o metabolismo de glicose e lipídios, o transporte de ácidos biliares e de xenobióticos e a polaridade epitelial, ao se ligar a elementos promotores/realçadores (enhancers) de alvos específicos de tecido. A atividade do HNF-1α integra sinais metabólicos e de desenvolvimento para manter a identidade e a função de hepatócitos e de células beta pancreáticas. Variações genéticas ou expressão desregulada de HNF1A estão associadas a formas monogênicas e complexas de diabetes, bem como a fenótipos hepáticos e renais, tornando-o um nó-chave para estudos mecanísticos de doenças metabólicas.

HNF-1α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HNF1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HNF-1α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HNF1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HNF1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HNF-1α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HNF1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HNF-1α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HNF-1α em células tumorais com expressão de HNF1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.