HMG-I/HMG-Y CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402396

概要

HMGA1は、クロマチンの構造を規定するHMG-IおよびHMG-Yというアーキテクチュラル・クロマチンタンパク質をコードしている。これらはAT-hook型のDNA結合因子であり、クロマチン構造を再編することで、転写、複製、ならびに高次のゲノム構造を調節する。ATに富む制御領域に結合することにより、HMGA1はエンハンソソームの形成を促進し、細胞周期制御、DNA損傷応答、NF-κB依存的遺伝子発現などの炎症経路を含む、シグナル伝達に連動した転写プログラムに影響を及ぼす。HMGA1の発現や活性の破綻は、細胞の可塑性、増殖、代謝適応の変化と関連し、がん原性の転写ネットワークや腫瘍進展の文脈でしばしば研究されている。さらにHMGA1は、系譜特異的座位におけるクロマチンアクセシビリティにも影響するため、エピジェネティック制御やストレス応答性遺伝子発現を解析するうえで有用な結節点となる。

HMG-I/HMG-Y CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHMGA1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HMGA1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HMGA1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HMG-I/HMG-Yタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HMG-I/HMG-Yシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HMGA1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HMG-I/HMG-Yの機能に不可欠なHMGA1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HMGA1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HMG-I/HMG-Y CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHMG-I/HMG-Y CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HMGA1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HMG-I/HMG-Y HDRプラスミド（h）および HMG-I/HMG-Y HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHMGA1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHMGA1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。