HLFCRISPR激活质粒(h): sc-404752-ACT

人源 HLF（hepatic leukemia factor，肝性白血病因子）编码一种 PAR bZIP 转录因子，能够结合 DNA 调控元件，控制参与细胞分化、昼夜节律相关转录以及应激反应性基因表达的基因程序。HLF 参与塑造造血谱系身份与发育时序的转录网络，并对细胞周期调控和存活通路产生下游影响。HLF 表达失调与造血状态改变及在与白血病相关的背景下发生的致癌性转录重编程有关，因此是研究转录因子驱动表型的一个有用节点。作为核内调控因子，HLF 常被用于研究其对启动子/增强子活性、基因调控回路以及谱系特异性转录可塑性的影响。

HLF CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性HLF的表达。

HLF CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的HLF基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于HLF转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性HLF表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的HLF位点，并能够研究内源性位点上依赖于HLF的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在HLF表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟HLF通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。