Particules Lentivirales d'Activation (h) HLA-E: sc-403124-LAC

HLA-E code une molécule non classique du CMH de classe I qui présente un répertoire peptidique restreint, incluant des peptides de séquence signal (« leader peptides ») issus d’autres protéines HLA de classe I, afin de réguler la surveillance immunitaire. En se liant à des récepteurs inhibiteurs et activateurs tels que NKG2A/CD94 et NKG2C/CD94 sur les cellules NK et certains sous-ensembles de lymphocytes T, HLA-E module la cytotoxicité, la production de cytokines et la tolérance à la surface cellulaire. Son expression et le chargement en peptides sont liés aux voies de traitement et de présentation de l’antigène impliquant TAP et le complexe de chargement des peptides dans le réticulum endoplasmique. Une abondance ou une présentation peptidique d’HLA-E dérégulées sont étudiées dans des contextes d’infection, d’inflammation, d’échappement immunitaire tumoral et d’immunobiologie de la transplantation, où la signalisation de point de contrôle des cellules NK façonne les réponses immunitaires.

Les particules d'activation lentivirales HLA-E (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HLA-E dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HLA-E (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HLA-E, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HLA-E. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HLA-E ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.