HLA-DRβ1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406727-ACT

HLA-DRB1 codifica a cadeia β do complexo principal de histocompatibilidade (MHC) de classe II HLA-DR, formando um recetor heterodimérico que apresenta peptídeos derivados do meio extracelular às células T CD4+. Ao regular o processamento e a apresentação de antigénios, a HLA-DRβ1 ajuda a moldar a ativação inicial das células T, a tolerância periférica e a dinâmica das redes imunitárias impulsionadas por citocinas em células apresentadoras de antigénio profissionais. A variação em HLA-DRB1 influencia a especificidade de ligação a peptídeos e altera o reconhecimento imunitário, associando este locus à suscetibilidade e à gravidade de múltiplas doenças imunomediadas e inflamatórias. Como um nó central da imunidade adaptativa, a HLA-DRβ1 é frequentemente estudada em contextos como a apresentação de autoantigénios, a resposta a patogénios e a estratificação imunogenética.

HLA-DRβ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HLA-DRB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HLA-DRβ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HLA-DRB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HLA-DRB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HLA-DRβ1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HLA-DRB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HLA-DRβ1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HLA-DRβ1 em células tumorais com expressão de HLA-DRB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.