HLA-DRα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401010-ACT

HLA-DRA codifica a cadeia HLA-DRα, um componente essencial dos heterodímeros do MHC classe II que apresentam antígenos peptídicos exógenos a células T CD4+ e coordenam a ativação da imunidade adaptativa. A HLA-DRα participa das vias de processamento e apresentação de antígenos, incluindo o tráfego dependente da cadeia invariante através de compartimentos endossomais e o carregamento de peptídeos regulado pela HLA-DM, moldando a seleção de células T e as respostas imunes periféricas. Variações na expressão ou na regulação do MHC classe II estão intimamente ligadas à desregulação imune e à patologia inflamatória, com grande relevância para autoimunidade e imunobiologia de transplantes. A expressão alterada de HLA-DR também é amplamente usada como marcador de estados de ativação de células mieloides e de células B, contribuindo para estudos sobre diferenciação de células imunes e respostas à sinalização por citocinas.

HLA-DRα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HLA-DRA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HLA-DRα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HLA-DRA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HLA-DRA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HLA-DRα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HLA-DRA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HLA-DRα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HLA-DRα em células tumorais com expressão de HLA-DRA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.