HLA-DQB1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403051-ACT

HLA-DQB1 codifica a cadeia β do complexo principal de histocompatibilidade (MHC) de classe II HLA-DQ, que se emparelha com HLA-DQA para apresentar a células T CD4+ peptídeos derivados do meio extracelular. Esse eixo de apresentação de antígenos é central para a ativação da imunidade adaptativa, a seleção tímica e a tolerância periférica, moldando a ajuda das células T e as respostas subsequentes das células B. Variações em HLA-DQB1 influenciam a especificidade de ligação a peptídeos e estão fortemente associadas à predisposição a autoimunidade e à inflamação mediada pelo sistema imune, incluindo diabetes tipo 1 e doença celíaca. A expressão desregulada de HLA-DQ e a apresentação alterada de antígenos também podem afetar a vigilância imunológica contra tumores e as respostas a sinais inflamatórios.

HLA-DQB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HLA-DQB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HLA-DQB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HLA-DQB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HLA-DQB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HLA-DQB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HLA-DQB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HLA-DQB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HLA-DQB1 em células tumorais com expressão de HLA-DQB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.