HLA-DOβ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420773
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- HLA-DOβ O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico HLA-DOβ, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
HLA-DOβ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420773 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
H2-Ob codifica o ortólogo murino de HLA-DOβ, uma proteína não clássica associada ao MHC classe II que forma um heterodímero com DOα em células apresentadoras de antígeno. Esse complexo se localiza em compartimentos endossomais/lisossomais tardios e modula o carregamento de peptídeos no MHC classe II ao regular a atividade de HLA-DM/H2-DM, moldando assim o repertório de peptídeos apresentados às células T CD4+. Por meio de sua influência no processamento endossomal de antígenos e no tráfego de MHC II, H2-Ob contribui para a tolerância imunológica, a ativação da imunidade adaptativa e a qualidade das respostas humorais. O desequilíbrio na relação DO/DM e a apresentação antigênica alterada via MHC II são relevantes para estudos de autoimunidade, infecção e mecanismos de doenças inflamatórias em modelos murinos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HLA-DOβ (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene H2-Ob em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do H2-Ob, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do H2-Ob na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HLA-DOβ.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de H2-Ob para a investigação da sinalização de HLA-DOβ, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) H2-Ob críticos para a função HLA-DOβ
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos H2-Ob para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo HLA-DOβ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo HLA-DOβ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus H2-Ob. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo HLA-DOβ Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR HLA-DOβ (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia H2-Ob para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo H2-Ob definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.