HLA-B Plasmide Double Nickase (h): sc-400627-NIC

HLA-B codifica una catena pesante classica del MHC di classe I che si assembla con la β2-microglobulina per presentare antigeni peptidici endogeni alle cellule T CD8⁺. Questo asse di presentazione dell’antigene modella la sorveglianza immunitaria, influenza la selezione timica e la tolleranza periferica, e si integra con la segnalazione dell’interferone e con le vie di processamento dell’antigene che coinvolgono TAP e componenti dell’immunoproteasoma. Polimorfismi e alterazioni dell’espressione di HLA-B sono collegati alla variabilità nel riconoscimento immunitario antivirale e antitumorale e sono associati a disturbi immunomediati, inclusi la spondilite anchilosante e reazioni di ipersensibilità ai farmaci. Poiché HLA-B è altamente polimorfico e centrale per la composizione dell’immunopeptidoma, è frequentemente studiato nei modelli di compatibilità nei trapianti, biologia delle infezioni e immunologia dei tumori.

HLA-B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HLA-B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HLA-B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HLA-B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HLA-B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.