HJURP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405278-ACT

HJURP (proteína de reconhecimento da junção de Holliday) é uma chaperona de histonas centromérica essencial para a segregação cromossômica precisa. Ela medeia a deposição e a manutenção da variante de histona H3 CENP-A nos centrômeros, coordenando a montagem do cinetócoro e a progressão mitótica como parte de processos centrais de manutenção da cromatina no centrômero/cinetócoro e acoplados à replicação do DNA. Por seu papel na preservação da identidade do centrômero e da estabilidade do genoma, alterações na expressão ou na função de HJURP são frequentemente estudadas no contexto de estresse replicativo, aneuploidia e programas transcricionais associados à proliferação. Essas características tornam HJURP um alvo útil para investigar a fidelidade mitótica, a dinâmica da cromatina e fenótipos do ciclo celular relevantes para o câncer em modelos de células humanas.

HJURP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HJURP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HJURP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HJURP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HJURP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HJURP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HJURP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HJURP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HJURP em células tumorais com expressão de HJURP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.