Plásmido Doble Nickase (h) Histone H3.3A: sc-416802-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Histone H3.3A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Histone H3.3A (h) y el plásmido de doble nickasa Histone H3.3A (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a H3F3A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Histone H3.3A | sc-416802-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Histone H3.3A | sc-416802-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
H3F3A codifica la variante de histona independiente de la replicación H3.3A, un componente central de los nucleosomas que se deposita en genes transcritos activamente, elementos reguladores, telómeros y sitios de daño en el ADN. Mediante una incorporación específica de la variante, H3.3 contribuye a moldear la accesibilidad de la cromatina y coordina la regulación transcripcional, la actividad de los potenciadores (enhancers) y la memoria epigenética, además de influir en la reparación del ADN y la estabilidad del genoma. H3.3A participa en redes de remodelación de la cromatina y de modificación de histonas que se interconectan con procesos como las respuestas al estrés replicativo y los programas de destino celular. Alteraciones recurrentes en H3F3A y una deposición desregulada de H3.3 se han vinculado con estados anómalos de la cromatina en contextos de cáncer y desarrollo, lo que convierte a este locus en un punto de interés para estudios mecanísticos de la desregulación epigenética.
Histone H3.3A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus H3F3A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de H3F3A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de H3F3A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con H3F3A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.