Histone H2A.X Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400538-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Histone H2A.XO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Histone H2A.X (h) e o Plasmídeo Double Nickase Histone H2A.X (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para H2AFX. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Histone H2A.X Anticorpo (938CT5.1.1): sc-517336
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Histone H2A.X Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400538-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Histone H2A.X Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400538-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
H2AFX codifica a histona H2A.X, uma variante da histona H2A que é rapidamente fosforilada em Ser139 (γH2AX) em locais de quebras de dupla fita do DNA. Essa modificação atua como um sinal precoce, baseado na cromatina, que recruta e organiza fatores da resposta a danos no DNA, coordenando a ativação de checkpoints e a escolha da via de reparo entre recombinação homóloga e junção de extremidades não homólogas (NHEJ). A sinalização dependente de H2A.X faz interface com respostas ao estresse mediadas por ATM/ATR, com a estabilidade das forquilhas de replicação e com o remodelamento da cromatina, que em conjunto preservam a integridade do genoma. A desregulação da sinalização de H2A.X ou a dinâmica comprometida de γH2AX é amplamente utilizada como um indicador molecular de estresse genotóxico e é relevante para estudos de instabilidade genômica, biologia do câncer e radiossensibilidade.
Histone H2A.X O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus H2AFX em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de H2AFX. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função H2AFX. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com H2AFX interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.