Histone H1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404845-ACT

HIST1H1B はヒストン H1.5 をコードしている。ヒストン H1.5 はリンカーヒストン H1 ファミリーの一員で、ヌクレオソーム DNA の出入口部位に結合し、高次のクロマチン凝縮を促進するとともに、ゲノムへのアクセス性を制御する。クロマチン構造を調節することにより、ヒストン H1 は転写制御、DNA 複製タイミング、ならびに DNA 損傷応答と修復の協調に影響を及ぼす。H1 バリアントの発現変動や翻訳後修飾による制御異常は、エピジェネティックな制御破綻、異常な分化プログラム、そして複数の疾患状況で観察される増殖性表現型と関連しており、クロマチンおよび転写研究における機構的ハブとしての有用性を支持している。

Histone H1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HIST1H1Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Histone H1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HIST1H1B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHIST1H1B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Histone H1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHIST1H1B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHistone H1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHIST1H1B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHistone H1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。