hippocalcin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420938

Panoramica

Hpca codifica l’ippocalcina, una proteina neuronale legante il calcio con dominio EF-hand appartenente alla famiglia dei sensori neuronali del calcio, che mette in relazione i transienti di Ca2+ con cambiamenti nella segnalazione sinaptica e nell’eccitabilità. In seguito al legame con Ca2+, l’ippocalcina va incontro a un cambiamento conformazionale che può modulare l’associazione alla membrana e influenzare processi quali la plasticità sinaptica, il traffico dipendente dall’attività e programmi di espressione genica nei neuroni. Partecipa a reti di segnalazione calcio-dipendenti che intersecano le vie dei recettori dei neurotrasmettitori e le cascate a valle di chinasi/fosfatasi che plasmano il potenziamento e la depressione a lungo termine. La disregolazione dell’omeostasi neuronale del Ca2+ e l’alterata funzione dei sensori del calcio sono rilevanti per studi meccanicistici di fenotipi cognitivi e di disfunzioni dei circuiti associate a malattie neurodegenerative o neuropsichiatriche in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO hippocalcin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hpca in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hpca insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hpca a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina hippocalcin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hpca per lo studio della segnalazione di hippocalcin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hpca critici per la funzione di hippocalcin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hpca per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal hippocalcin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal hippocalcin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hpca. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal hippocalcin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR hippocalcin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hpca per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hpca definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.