HIF1a CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420856-ACT

マウスHif1aは、低酸素誘導因子1α（HIF1a）をコードしている。HIF1aは酸素濃度の低下に対する細胞応答を統合する、酸素感受性の転写因子である。安定化したHIF1aはARNTと二量体を形成し、低酸素応答エレメント（HRE）を含む遺伝子を活性化することで、解糖系代謝、血管新生シグナル、赤血球産生、ミトコンドリア機能、細胞生存を制御し、PI3K–AKT–mTOR経路やMAPK経路からの入力とも交差する。HIF1aはさらに、NF-κBおよびレドックス経路とのクロストークを介して炎症・免疫プログラムを協調的に制御し、骨髄系細胞の分極やバリア機能の適応を形作る。HIF1aシグナルの破綻は、虚血、慢性炎症、線維化、代謝疾患、腫瘍の低酸素生物学を扱うマウスモデル研究において、機序解明の要所として広く利用されている。

HIF1a CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Hif1aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HIF1a CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Hif1a 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHif1a転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HIF1aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHif1a遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHIF1a依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHif1a発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHIF1a経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。