HIF PHD3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403671-ACT

EGLN3は、低酸素誘導因子HIFのプロリン水酸化酵素3（PHD3）をコードしている。PHD3は酸素を感知するジオキシゲナーゼで、常酸素下においてHIF-αサブユニットを水酸化し、VHL依存的なユビキチン化とプロテアソーム分解を促進する。PHD3はHIFの転写出力を調整することで、解糖系代謝、血管新生シグナル、赤血球産生に関連するプログラム、酸化ストレス応答などを含む、低酸素への細胞適応に影響を与える。EGLN3の発現は低酸素やその他のストレス刺激によって動的に制御され、HIF経路内のフィードバック制御や、より広範なレドックス制御およびミトコンドリア恒常性ネットワークと結び付いている。EGLN3/PHD3活性およびHIFシグナルの異常は、腫瘍生物学、虚血に伴う組織ストレス、炎症、神経変性過程といった文脈でしばしば研究されており、酸素依存的な転写プログラムの組み替えが表現型を規定する主要因となる。

HIF PHD3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EGLN3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HIF PHD3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EGLN3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEGLN3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HIF PHD3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEGLN3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHIF PHD3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEGLN3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHIF PHD3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。