Hhip CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420853

概要

マウスHhip（hedgehog-interacting protein）は、Hedgehogリガンドに結合してシグナル伝達の活性化を制限する、膜関連型のHedgehogシグナル拮抗因子をコードします。リガンドの利用可能性を調節することで、HhipはSonic Hedgehog–GLI転写プログラムの下流における発生パターニング、組織恒常性、および上皮―間葉相互作用の制御に寄与します。Hhipの発現や制御の変化は、先天奇形や、異常増殖・線維化リモデリングなどを含む多様な病態生理学的状態に関与するとされる、Hedgehog経路出力の破綻と関連づけられています。経路の「ブレーキ」として、HhipはHedgehogシグナルが細胞運命決定、増殖、分化に影響する状況でしばしば研究されています。

Hhip CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHhip遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hhip内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hhipのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Hhipタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Hhipシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hhip欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Hhipの機能に不可欠なHhipエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hhipゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Hhip CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHhip CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hhip遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Hhip HDRプラスミド（m）および Hhip HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHhipホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHhip標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。