HGF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400433-ACT

肝細胞増殖因子（HGF）は分泌型の多機能性サイトカインであり、主に受容体型チロシンキナーゼであるMET受容体を介してシグナルを伝達し、上皮–間葉相互作用、細胞生存、増殖、運動性、および分岐形態形成を調節する。HGF–METの活性化は、下流のPI3K–AKT、RAS–MAPK、STAT、ならびに焦点接着（focal adhesion）シグナル伝達を作動させ、組織修復やリモデリングを形作る各種の情報を統合する。HGFの発現異常や経路の過剰活性化は、腫瘍細胞の浸潤、転移、血管新生、間質–腫瘍間クロストークの研究で頻繁に取り上げられるほか、線維化および炎症性微小環境においても重要な検討対象となっている。細胞可塑性を文脈依存的に調節する因子として、HGFはヒト細胞モデルにおけるパラクリンシグナルや微小環境駆動性の表現型を解析する目的で広く用いられている。

HGF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HGFの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HGF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HGF 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHGF転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HGFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHGF遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHGF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHGF発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHGF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。