HEXIM1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402333-ACT

O HEXIM1 humano (hexamethylene bis-acetamide inducible 1) codifica uma proteína reguladora nuclear que restringe o alongamento transcricional ao sequestrar o P-TEFb (CDK9–Ciclina T) no complexo 7SK snRNP, limitando assim a fosforilação do CTD da RNA polimerase II e a liberação da pausa. Por meio desse controle do alongamento dependente de CDK9, o HEXIM1 influencia programas de expressão gênica responsivos a estímulos, a progressão do ciclo celular e redes transcricionais associadas à diferenciação. A expressão alterada de HEXIM1 ou a perturbação da homeostase 7SK/P-TEFb tem sido associada à desregulação transcricional observada em contextos proliferativos e de adaptação ao estresse, tornando o HEXIM1 um nó útil para estudar mecanismos que conectam entradas de sinalização à saída transcricional em todo o genoma. Investigar a função de HEXIM1 apoia pesquisas sobre controle transcricional, regulação associada à cromatina e vias relevantes para doenças impulsionadas por dinâmicas aberrantes de alongamento.

HEXIM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HEXIM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HEXIM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HEXIM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HEXIM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HEXIM1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HEXIM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HEXIM1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HEXIM1 em células tumorais com expressão de HEXIM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.