Hex Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403827-ACT

O HHEX humano codifica Hex, um fator de transcrição homeobox que regula a especificação de linhagens e a organogênese, com papéis proeminentes no padrão inicial do endoderma, no desenvolvimento hematopoético e na biologia vascular. Hex coordena programas transcricionais que controlam decisões de destino celular, proliferação e diferenciação por meio de ligação ao DNA dependente de sequência e interação com complexos corre regulatórios. Em tecidos adultos, o HHEX contribui para a manutenção da homeostase imune e metabólica, e a expressão desregulada tem sido associada a diferenciação hematopoética alterada e a estados transcricionais oncogênicos. Estudos genéticos e de expressão também associam o HHEX a características cardiometabólicas, apoiando seu uso como um nó mecanístico em pesquisas sobre vias endócrinas e inflamatórias.

Hex O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HHEX sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Hex O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HHEX em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HHEX, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Hex. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HHEX nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Hex no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Hex em células tumorais com expressão de HHEX silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.