HESX1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409466-ACT

HESX1 (gene homeobox expresso em células ES 1) codifica um repressor transcricional do tipo homeobox paired-like, essencial para o padrão inicial do prosencéfalo anterior e do primórdio da hipófise. Atua em redes transcricionais do desenvolvimento que integram a sinalização SHH, WNT e BMP para controlar a especificação do destino celular, a formação de fronteiras teciduais e a proliferação de progenitores durante a embriogênese. O HESX1 regula programas de linhagem no neuroectoderma e no ectoderma oral, ajudando a coordenar a organogênese e o desenvolvimento do eixo endócrino. A atividade desregulada de HESX1 está implicada em hipopituitarismo congênito e malformações cerebrais da linha média, sustentando seu uso como gene modelo para estudar o controle transcricional no desenvolvimento humano e em mecanismos de doença.

HESX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HESX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HESX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HESX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HESX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HESX1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HESX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HESX1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HESX1 em células tumorais com expressão de HESX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.