HES5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401625-ACT

HES5 codifica um represssor transcricional do tipo basic helix–loop–helix que atua como um efetor canônico da sinalização Notch. Ao se ligar a motivos semelhantes a E-box e recrutar complexos correpressores, o HES5 suprime programas pró-diferenciação para manter a identidade de progenitores neurais e regular o timing da neurogênese. Sua atividade integra-se a vias que controlam decisões de destino celular, incluindo crosstalk com a sinalização Wnt/β-catenina, BMP e SHH durante o desenvolvimento. A expressão desregulada de HES5 tem sido associada a estados de diferenciação aberrantes e a capacidade proliferativa alterada em contextos nos quais a atividade da via Notch contribui para a biologia da doença.

HES5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HES5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HES5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HES5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HES5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HES5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HES5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HES5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HES5 em células tumorais com expressão de HES5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.