HERG Plasmide Double Nickase (h): sc-401143-NIC

KCNH2 codifica il canale del potassio umano HERG (Kv11.1) voltaggio-dipendente, responsabile della corrente rettificante ritardata rapida (IKr), un determinante principale della ripolarizzazione del potenziale d’azione cardiaco e della durata dell’intervallo QT. L’attività del canale HERG si integra nelle vie dell’eccitabilità e dell’omeostasi ionica modellando la dinamica del potenziale di membrana e la tempistica del periodo refrattario. Alterazioni genetiche o funzionali di KCNH2 sono associate a fenotipi di QT lungo ereditari e acquisiti e a una maggiore suscettibilità alle aritmie ventricolari; inoltre, il canale rappresenta un frequente bersaglio off-target di interesse critico in studi di elettrofisiologia e di farmacologia della sicurezza. Al di là dei cardiomiociti, l’espressione di KCNH2 in contesti cellulari eccitabili e proliferativi supporta ricerche sul traffico del canale, sulla regolazione del gating e sul crosstalk tra membrana e segnalazione.

HERG Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KCNH2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KCNH2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KCNH2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KCNH2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.