HECTD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406532

概要

HECTD3は、標的タンパク質へのユビキチン転移を触媒するHECTドメイン型E3ユビキチンリガーゼをコードしており、タンパク質の安定性、細胞内局在、シグナル伝達の出力を規定します。HECTD3は自然免疫および炎症性シグナルの制御に関与するとされ、経路構成因子をユビキチン依存的に制御することで、NF-κBやインターフェロン関連経路を含むシグナルを調節します。プロテオスタシスとシグナル伝達を調整することにより、HECTD3は細胞ストレス応答、増殖、アポトーシスにも影響し得ます。HECTD3が関与するユビキチン化プログラムの破綻は、がん関連の表現型や免疫介在性疾患の機序と関連づけられており、経路解析モデルでの利用を支持します。

HECTD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHECTD3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HECTD3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HECTD3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HECTD3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HECTD3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HECTD3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HECTD3の機能に不可欠なHECTD3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HECTD3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HECTD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHECTD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HECTD3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HECTD3 HDRプラスミド（h）および HECTD3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHECTD3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHECTD3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。