HCN3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407361-NIC

HCN3は、過分極で活性化される環状ヌクレオチド依存性（HCN）チャネルをコードしており、膜の過分極時にNa⁺/K⁺の混合内向き電流を伝導することでIh電流に寄与します。電位依存性と環状ヌクレオチドによる調節を統合することで、HCN3は興奮性細胞における静止膜電位、リズミカルな興奮性、ならびに神経調節性シグナルに対する応答性の制御に関与します。このチャネルはペースメーカー様活動やニューロンの発火パターンに関連する電気生理学的プロセスに関与し、膜コンダクタンスを調整するcAMP依存性経路とも連動します。HCNチャネル活性の変化は、不整脈や発作に関連する研究領域で問題となる興奮性の破綻（異常）表現型と関連づけられており、疾患関連の細胞モデルにおけるイオンチャネル機能の機序解明研究を支持します。

HCN3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HCN3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HCN3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HCN3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HCN3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。