HCII CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420808

概要

Serpind1はヘパリンコファクターII（HCII）をコードする。HCIIはセリンプロテアーゼ阻害因子であり、トロンビンを選択的に不活化する。その活性はデルマタン硫酸などのグリコサミノグリカンによって著しく増強される。HCIIはトロンビンによるタンパク質分解を抑制することで凝固を調節し、血小板活性化、血管炎症、細胞外マトリックスのリモデリングに影響するトロンビン駆動性シグナル伝達経路とも関与する。マウス系では、Serpind1の機能は止血および血管生物学の文脈で検討されることが多く、トロンビン制御の変化は血栓形成に関連する表現型や炎症応答に影響し得る。セルピンとプロテアーゼのバランス破綻は、血栓・炎症性疾患の機序モデルや血管損傷応答モデルにおいて重要である。

HCII CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSerpind1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Serpind1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Serpind1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HCIIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HCIIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Serpind1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HCIIの機能に不可欠なSerpind1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Serpind1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HCII CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHCII CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Serpind1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HCII HDRプラスミド（m）および HCII HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSerpind1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSerpind1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。