HCF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403097-ACT

HCFC1 codifica o fator 1 da célula hospedeira (HCF1), um correagulador transcricional associado à cromatina que coordena a progressão do ciclo celular e a expressão gênica específica de linhagem. O HCF1 conecta fatores de transcrição específicos de sequência à maquinaria epigenética e transcricional, incluindo complexos de modificação de histonas, para modular a atividade de promotores e o estado da cromatina. Por meio dessas interações, o HCF1 influencia processos como a transição G1/S, programas transcricionais associados à replicação e a regulação de genes metabólicos. A desregulação ou variações patogênicas em HCFC1 têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e a alterações no controle transcricional, reforçando sua relevância para o estudo de mecanismos de regulação gênica em modelos de doença humana.

HCF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HCFC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HCF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HCFC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HCFC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HCF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HCFC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HCF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HCF1 em células tumorais com expressão de HCFC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.