HBO1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416462-ACT

O KAT7 humano codifica a acetiltransferase de histonas HBO1, uma enzima da família MYST que acetila as histonas H4 e H3 para promover a acessibilidade da cromatina e a competência transcricional. A HBO1 atua em complexos multiproteicos que conectam a regulação epigenética ao licenciamento da replicação do DNA, sustentando a montagem do complexo de pré-replicação e a progressão da fase S. Por meio de seus papéis no remodelamento da cromatina, no controle da expressão gênica e na manutenção do genoma, KAT7/HBO1 é frequentemente estudado em vias que governam proliferação celular, diferenciação e respostas a danos no DNA. A acetilação de histonas desregulada e estados de cromatina associados à replicação envolvendo a HBO1 têm sido implicados em programas transcricionais oncogênicos e em outras doenças ligadas à instabilidade epigenética.

HBO1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KAT7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HBO1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KAT7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KAT7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HBO1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KAT7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HBO1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HBO1 em células tumorais com expressão de KAT7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.