Hbb-y CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420805

概要

Hbb-y は、マウスのヘモグロビンβ様サブユニットをコードしており、赤血球におけるヘモグロビン四量体の組み立てと酸素輸送に寄与します。赤血球系分化プログラムの一環として、Hbb-y の発現は、ヘム生合成、グロビン鎖のバランス、ならびに赤血球系の転写ネットワークにより制御される赤血球成熟経路と協調して調節されます。βグロビン様遺伝子の変化はヘモグロビンの安定性や赤血球生理を乱し得るため、貧血、ヘモグロビン異常症、ストレス赤血球産生に関連する機構を研究するモデルとなります。マウスでは、Hbb-y はβグロビン遺伝子クラスター内における発生段階特異的および系統特異的な制御を解析するうえでも有用です。

Hbb-y CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHbb-y遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hbb-y内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hbb-yのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Hbb-yタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Hbb-yシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hbb-y欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Hbb-yの機能に不可欠なHbb-yエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hbb-yゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Hbb-y CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHbb-y CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hbb-y遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Hbb-y HDRプラスミド（m）および Hbb-y HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHbb-yホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHbb-y標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。