Plasmide CRISPR/Cas9 KO HB-EGF (h): sc-400795

Présentation

HBEGF code le facteur de croissance de type EGF se liant à l’héparine (HB‑EGF), un ligand ancré à la membrane qui peut être libéré par clivage protéolytique (« shedding ») afin de transmettre des signaux via les récepteurs de la famille EGFR/ERBB. HB‑EGF active en aval les voies MAPK/ERK, PI3K–AKT, ainsi que d’autres voies mitogènes et de survie qui régulent la prolifération et la migration des cellules épithéliales et stromales, ainsi que les programmes de réponse aux lésions. Cet axe est fréquemment étudié dans des contextes de signalisation EGFR aberrante, notamment en biologie tumorale, dans le remodelage inflammatoire et dans les réponses au stress vasculaire et cardiaque. La dynamique d’expression de HBEGF recoupe également l’activité des métalloprotéases ADAM et des réseaux de facteurs de croissance paracrines/autocrines qui façonnent les microenvironnements tissulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HB-EGF (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HBEGF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HBEGF, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HBEGF à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HB-EGF.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HBEGF pour l'étude de la signalisation de HB-EGF, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HBEGF essentiels à la fonction de HB-EGF
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HBEGF pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HB-EGF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HB-EGF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HBEGF. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HB-EGF plasmide HDR (h) et le HB-EGF (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HBEGF pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HBEGF définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.