CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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HAS2 Double Nickaseプラスミド (m): sc-420798-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HAS2 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HAS2ダブルニカースプラスミド（m）およびHAS2ダブルニカースプラスミド（m2）は、Has2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: HAS2 抗体 (A-7): sc-514737
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HAS2 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-420798-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HAS2 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-420798-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスHas2は、ヒアルロン酸合成酵素2（HAS2）をコードしている。HAS2は膜結合型の糖転移酵素で、細胞膜上でヒアルロン酸を重合し、細胞外マトリックスへと輸送する。HAS2によるヒアルロン酸産生は、細胞周囲マトリックスの組み立て、組織の水和、ならびに細胞接着・遊走・増殖に影響する細胞—マトリックス間シグナル伝達を制御し、CD44やRHAMMが関与する経路や細胞骨格リモデリングを介して作用する。Has2の活性は発生過程の形態形成、創傷修復、炎症シグナル、線維芽細胞の活性化と密接に結びついており、ヒアルロン酸恒常性の破綻は線維化、血管リモデリング、腫瘍関連間質の生物学に関与するとされる。細胞外マトリックスの力学特性や増殖因子の利用可能性を左右する中心的因子として、Has2は上皮—間葉転換（EMT）、血管新生、免疫細胞トラフィッキングの文脈でしばしば研究されている。
HAS2 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Has2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Has2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Has2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Has2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。