HAPLN1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419816

概要

Hapln1は、ヒアルロン酸‐プロテオグリカン結合タンパク質1（HAPLN1）をコードしています。HAPLN1は細胞外マトリックス（ECM）成分の一つで、ヒアルロン酸とプロテオグリカンの凝集体を安定化し、細胞周囲マトリックスの構造的な組織化を支えます。HAPLN1はヒアルロン酸とコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの相互作用を強化することで、軟骨や結合組織の恒常性に寄与し、細胞接着、メカノトランスダクション（機械刺激のシグナル変換）、およびマトリックス依存的シグナル伝達に影響を与えます。その機能はECMの組み立てやリモデリング過程と密接に結びついており、組織発生、炎症、線維化を制御する経路とも交差します。HAPLN1に関連するマトリックス構築が破綻すると、変性関節の表現型や、細胞移動や組織恒常性を調節し得るより広範な間質の変化に関与することが示唆されています。

HAPLN1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHapln1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hapln1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hapln1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HAPLN1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HAPLN1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hapln1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HAPLN1の機能に不可欠なHapln1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hapln1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HAPLN1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHAPLN1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hapln1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HAPLN1 HDRプラスミド（m）および HAPLN1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHapln1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHapln1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。