HAPLN1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419816

Descripción general

Hapln1 codifica la proteína de enlace 1 de hialuronano y proteoglicanos (HAPLN1), un componente de la matriz extracelular (MEC) que estabiliza los agregados de hialuronano–proteoglicano y favorece la organización estructural de las matrices pericelulares. Al reforzar las interacciones entre el hialuronano y los proteoglicanos de sulfato de condroitina, HAPLN1 contribuye a la integridad del cartílago y del tejido conectivo e influye en la adhesión celular, la mecanotransducción y la señalización dependiente de la matriz. Su actividad está estrechamente vinculada a los procesos de ensamblaje y remodelación de la MEC que se solapan con vías que regulan el desarrollo tisular, la inflamación y la fibrosis. La desregulación de la arquitectura matricial asociada a HAPLN1 se ha implicado en fenotipos degenerativos articulares y en alteraciones estromales más amplias que pueden modular la migración celular y la homeostasis tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HAPLN1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Hapln1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Hapln1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Hapln1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HAPLN1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Hapln1 para la investigación de la señalización de HAPLN1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Hapln1 críticos para la función de HAPLN1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Hapln1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HAPLN1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido HAPLN1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Hapln1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HAPLN1 (m) y el plásmido HDR HAPLN1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Hapln1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Hapln1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.