HAI-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-423128-LAC

O gene Spint1 de camundongo codifica o inibidor 1 do ativador do fator de crescimento de hepatócitos (HAI-1), um inibidor de serinoproteases do tipo Kunitz ancorado à membrana que restringe a proteólise pericelular em superfícies epiteliais. O HAI-1 regula a ativação e a atividade de proteases como a matriptase (ST14) e a HGFA, moldando assim a remodelação da matriz extracelular, a maturação de fatores de crescimento e a homeostase da barreira epitelial. Por meio dessas redes de proteases, o Spint1 influencia processos como adesão celular, polaridade e migração, e está intimamente ligado a contextos de sinalização como as vias dependentes de HGF/c-MET. Um desequilíbrio na relação Spint1/HAI-1 tem sido associado a remodelação epitelial aberrante e a fenótipos inflamatórios ou neoplásicos, tornando-o relevante para estudos mecanísticos da integridade epitelial e da sinalização impulsionada por proteases.

As Partículas de Ativação Lentivirais HAI-1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Spint1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais HAI-1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Spint1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de HAI-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Spint1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.