GTPBP10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413794-ACT

O GTPBP10 humano codifica uma proteína mitocondrial de ligação a GTP, implicada nas etapas finais da maturação do mitorribossomo, apoiando a montagem da subunidade ribossômica grande e a tradução mitocondrial eficiente. Ao regular a produção de componentes da fosforilação oxidativa codificados pelo DNA mitocondrial, o GTPBP10 contribui para a integridade da cadeia respiratória, a geração de ATP e a proteostase mitocondrial. A perturbação da biogênese do mitorribossomo e da tradução mitocondrial está amplamente associada a respostas ao estresse bioenergético, alterações no equilíbrio redox e vias de disfunção mitocondrial que são frequentemente investigadas em modelos de doenças neuromusculares e metabólicas, bem como na adaptação de células cancerígenas. Como resultado, o GTPBP10 serve como um ponto útil para estudar a montagem do ribossomo mitocondrial, a regulação da OXPHOS e a sinalização de estresse a jusante.

GTPBP10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GTPBP10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GTPBP10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GTPBP10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GTPBP10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GTPBP10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GTPBP10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GTPBP10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GTPBP10 em células tumorais com expressão de GTPBP10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.