GSTO1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404107-ACT

ヒトGSTO1は、グルタチオンS-トランスフェラーゼ・オメガ1（glutathione S-transferase omega-1）をコードしており、細胞内のレドックス恒常性の維持に重要なチオールトランスフェラーゼ反応および脱グルタチオン化反応を触媒する、非典型的なGSTファミリー酵素です。タンパク質チオールのS-グルタチオン化状態を調節することで、GSTO1は抗酸化防御、プロテオスタシス、ならびにグルタチオン代謝および解毒経路と連動するストレス応答性シグナル伝達に寄与します。GSTO1活性の変化や遺伝的多型は、神経変性や心代謝系の表現型、さらに腫瘍生物学の一部の側面を含む、酸化ストレスと炎症に関連した疾患における感受性や進行と関連することが報告されています。これらの特性によりGSTO1は、レドックス制御シグナル、ミトコンドリアおよび小胞体（ER）ストレス応答、そしてグルタチオン依存的な化学反応が細胞運命決定に与える影響を解析するうえで有用な結節点となります。

GSTO1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GSTO1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GSTO1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GSTO1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGSTO1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GSTO1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGSTO1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGSTO1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGSTO1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGSTO1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。