Plasmide CRISPR d'Activation (h) GSK3 beta: sc-400090-ACT

Le gène humain **GSK3B** code la glycogène synthase kinase 3 bêta (GSK3β), une kinase sérine/thréonine constitutivement active qui intègre les signaux liés aux nutriments et aux facteurs de croissance afin de coordonner les décisions de destinée cellulaire. GSK3β est un régulateur négatif central de la signalisation canonique Wnt/β-caténine et participe également à des processus associés aux voies PI3K–AKT, au métabolisme de l’insuline/du glycogène, à Hedgehog, Notch et à NF-κB, influençant la transcription, la prolifération, l’apoptose et la différenciation. Par la phosphorylation de divers substrats tels que la β-caténine et de multiples régulateurs transcriptionnels, GSK3β influence la dynamique du cytosquelette, le contrôle du cycle cellulaire et l’homéostasie métabolique. Une dérégulation de la signalisation de GSK3B a été impliquée, dans différents contextes de recherche, notamment en cancérologie, dans des voies associées à la neurodégénérescence, dans l’inflammation et dans des modèles de maladies métaboliques.

GSK3 beta Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GSK3B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GSK3 beta Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GSK3B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GSK3B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GSK3 beta. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GSK3B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GSK3 beta au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GSK3 beta dans les cellules tumorales présentant une expression de GSK3B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.