GRPR CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401637-ACT

ヒトGRPRは、ガストリン放出ペプチド受容体をコードしており、ガストリン放出ペプチドおよび関連するボンベシン様リガンドに結合して神経内分泌シグナル伝達を調節する、7回膜貫通型のGPCRです。GRPRの活性化により三量体Gタンパク質が動員され、PLCβ依存的なホスホイノシチド代謝回転、細胞内Ca2+動員、ならびに下流のMAPK/ERKおよびPKCシグナルが促進され、増殖、分泌、平滑筋収縮性に影響を与えます。この受容体は感覚処理および消化管生理の研究に広く関連し、GRPRシグナルの変調は、複数のモデル系において腫瘍形成性および神経行動学的表現型と関連づけられています。GRPRの発現と経路活性は、ヒト細胞におけるGPCR駆動性の転写プログラム、カルシウム動態、ならびにリガンド依存的なシグナル伝達バイアスを解析するためにしばしば用いられます。

GRPR CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GRPRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GRPR CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GRPR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGRPR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GRPRの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGRPR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGRPR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGRPR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGRPR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。