group IVF sPLA2 Plasmide Double Nickase (h): sc-415215-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- group IVF sPLA2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il group IVF sPLA2 Double Nickase Plasmid (h) e il group IVF sPLA2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PLA2G4F. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: group IVF sPLA2 Antibody (C-6): sc-398729
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
group IVF sPLA2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-415215-NIC | 20 µg | $410.00 |
PLA2G4F codifica la fosfolipasi A2 secretoria di gruppo IVF (sPLA2), un enzima lipolitico extracellulare che idrolizza i glicerofosfolipidi di membrana liberando acidi grassi liberi e lisofosfolipidi. Regolando la disponibilità di acido arachidonico, PLA2G4F può influenzare la biosintesi degli eicosanoidi e la segnalazione mediata da mediatori lipidici, che si intreccia con le risposte infiammatorie, la biologia della barriera epiteliale e il rimodellamento adattativo delle membrane in condizioni di stress. Un turnover fosfolipidico alterato e l’attività della sPLA2 sono stati esaminati in contesti di infiammazione cronica e di riprogrammazione lipidica associata al cancro, in cui cambiamenti nei mediatori lipidici e nella composizione di membrana possono influenzare proliferazione, migrazione e comunicazione con il sistema immunitario.
group IVF sPLA2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PLA2G4F nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PLA2G4F. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PLA2G4F. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PLA2G4F interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.